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口腔医学论文 茶多酚口腔脂质体凝胶的制备

2018-12-18 15:06:46来源:组稿人论文网作者:婷婷

  摘 要:目的 研制茶多酚新制剂。方法 以胆固醇、卵磷脂、茶多酚为原料制备成茶多酚脂质体,测包封率,再用卡波姆940,添加适量的三乙醇胺、甘油、尼泊金乙酯和茶多酚脂质体制成茶多酚脂质体凝胶,做含量测定,拿达到标示量的制剂在烧杯中中测定释放度,这三个检测都需要用紫外分光光度法。结果 茶多酚脂质体的包封率为37.59%,茶多酚脂质体口腔凝胶求得标示量为92.4%,符合90%~110%,茶多酚凝胶释放比茶多酚脂质体凝胶释放的快。

  关键词:茶多酚;脂质体;凝胶;紫外分光光度

  口腔疾病是一类常见疾病,如口腔溃疡、口臭、牙周炎、唇病、龋齿等疾等的发病率都非常高且容易被人忽略从而发生病变,严重影响健康。中国有非常长的饮茶历史,在很早之前人们就不只把茶当做食物,也把茶叶当做药物使用。据现代研发现,茶叶有很强的抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力、消炎杀菌等保健作用,能很好的预防治疗口腔疾病,茶叶中发挥其强大健康保健作用的主要成分为茶多酚。但茶多酚作为一种水溶性成分,制成药后,用药不容易被细胞吸收。脂质体由于其药物被包裹,能使药物释放减慢、延长,且由于脂质体的成分与细胞相似,更容易发挥药效,茶多酚的制备方法常见的有5种,操作简单。 查文献得知研究茶多酚凝胶类文献较多,然茶多酚脂质体凝胶类文献很少。本实验用胆固醇、卵磷脂、茶多酚为原料制成茶多酚脂质体,再用卡波姆940,添加适量的三乙醇胺、甘油、尼泊金乙酯和茶多酚脂质体制备成茶多酚脂质体凝胶。希望能为茶多酚新制剂的发展做贡献。

  材料与仪器

  1.1材料

  茶多酚;大豆卵磷脂;胆固醇;卡波姆940(源叶生物 L17M8S36263);三乙醇胺(上海凌风化学试剂有限公司20140212);尼泊金乙酯;Na2HPO4·12H2O, EDTA.2Na, NaHCO3, KH2PO4,无水乙醇,甘油,FeSO4·7H2O均为分析醇

  1.2.仪器

  电子天平(Techcomp FA2004B);精密pH仪(PHS-3C Precison pH/mV Meter);超声波细胞粉碎仪(JY 92—IIN);紫外可见分光光度计(2600 UV/VIS SPECTROPHOTOMETER);离心机(TD6K);循环水真空泵(SHZ—DIII);旋转蒸发仪(RE52CS-1);集热式恒温加热磁力搅拌器(DF-101S)

  茶多酚脂质体的制备与包封率测定

  2.1茶多酚脂质体与空白脂质体的制备

  精密称取胆固醇40mg、卵磷脂160mg于50ml圆底烧瓶加入5ml氯仿,再加入用2ml无水乙醇溶解的40mg茶多酚溶液,超声3~5分钟,再放置旋转蒸发仪上,把温度调至40℃,在旋转中使其蒸干成膜,加入4mlpH7.5的磷酸盐缓冲溶液充分水化使膜完全溶解即制备成茶多酚脂质体。按上述步骤不加入茶多酚乙醇溶液即可制备空白脂质体。

  2.2脂质体包封率的计算

  2.2.1全波长扫描

  (1)茶多酚全波长扫描 精密称取茶多酚1.5mg于50ml容量瓶中用蒸馏水定容制备成30μg/ml的溶液,使用紫外分光光度计在波长200~600nm中进行扫描。

  (2)空白脂质体全波长扫描

  量取2ml空白脂质体溶液于25ml容量瓶中定容,进行全波长扫描,操作同茶多酚。

  2.2.2茶多酚标准曲线的建立

  精密称取茶多酚0.0250g用蒸馏水溶解后置于100ml容量瓶中定容制备成0.5mg/ml的母液;分别精密移取0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0ml的母液于10ml的容量瓶中,各加1.5ml水和2ml酒石酸亚铁再用pH7.5磷酸盐缓冲溶液定容,标记A~F,A号为空白参比溶液。在540nm下进行紫外分析测定吸光度,建立标准曲线,算得回归方程。

  2.2.3包封率的测定

  分别精密吸取2ml茶多酚脂质体溶液和空白脂质体溶液,放置离心机中以15000r/min离心,吸取1ml上清液于25ml容量瓶中定容,分别在540nm下测定吸光度,带入回归方程得茶多酚总药量(C总),算包封率。包封率公式可表现为:

  (公式2-1)

  2.2.4结果

  求得回归方程为y=0.0047x+0.0307,r=0.9984,脂质体的包封率为37.59%。

  3.茶多酚脂质体凝胶的制备、释放度试验与质量控制

  3.1茶多酚脂质体凝胶的制备

  称取40mg卡波姆940加适量水,放其静置使其充分溶胀,加适宜三乙醇胺,凝胶由白色不透明变澄清透明,加入上述茶多酚脂质体溶液2ml,600mg甘油和120mg尼泊金乙酯充分搅拌均匀,加蒸馏水至4ml。除用2mlpH7.5磷酸盐缓冲溶液溶解20mg茶多酚制成的溶液代替茶多酚脂质体溶液,其余均按照上述步骤制成普通茶多酚凝胶。

  3.2茶多酚脂质体凝胶的质量控制

  称取已经制成的茶多酚脂质体凝胶2g用蒸馏水稀释后于10ml容量瓶中定容,吸取1ml稀释的茶多酚脂质体凝胶溶液和1ml水分别于25ml容量瓶中,加5ml酒石酸亚铁,再加pH7.5磷酸盐缓冲溶液至刻度,水制成的为对照品,用紫外分光光度计在540nm下测定吸光度,带入上述已经求得的茶多酚回归方程,求标示量。

  3.3体外释放度试验

  3.3.1体外释放

  减取两节7cm长的透析袋,放入蒸馏水中煮沸30min,30min后戴手套用蒸馏水清洗3次,一端用封口夹夹住,装水检查封密性,分别装取2g茶多酚脂质体凝胶和2g普通茶多酚凝胶,分别用封口夹封住。取两个150ml烧杯,都装取100ml的透析液,放入磁石,分别放入装好药物的透析袋,用棉绳固定好封口夹使透析袋完全浸没在液体中,将烧杯放置于32℃水浴锅中,使磁石旋转,分别于30min,1h,2h,4h,6h时从烧杯中吸取20ml液体并补充20ml透析液。

  3.3.2释放度测定

  分别精密移不同时间的液体5ml于25ml容量瓶中,各加5ml酒石酸亚铁,用透析液定容,在紫外可见分光光度计下540nm处测定吸光度,带入回归曲线,算得各吸取点的茶多酚浓度,求出不同药物不同时刻的药物累计释放度(%)。累计释放度公式可表示为:

  (公式3-1)

  式中,Cn 为第 n 次取样时液体的浓度,Ci 为第 i 个取样点液体的浓度,Vn 为烧杯中释放介质体积,Vi 为从烧杯中取样量的体积,m 为透析袋中样品所含的茶多酚总量。

  3.4结果

  求得茶多酚脂质体凝胶标示量为92.4%,符合标示量90%~110%[11],不同凝胶的释放曲线图[12]如图3-1所示:

  图3-1 不同凝胶剂的释放曲线

  4.讨论

  4.1磷酸盐缓冲溶液

  磷酸盐缓冲溶液制成pH为7.5的较好,酒石酸亚铁与茶多酚在弱酸条件下不显色,中性环境开始显色,在pH7.5显色明显,茶多酚不适合碱性环境,其结构容易发生改变,所以pH7.5最合适。

  4.2卡波姆

  卡波姆制成的药易涂抹,不妨碍皮肤正常功能,且能延长药物与患处的接触时间,使药物更好的发挥药效。

  4.3制剂

  卡波姆脂质体凝胶制剂的制法简单,成本较低,质量易控制,可推广制备。

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