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药学鉴定类论文 杠板归的生药学鉴定

2018-12-20 15:14:29来源:组稿人论文网作者:婷婷

  摘 要:目的 对杠板归进行系统的生药学鉴定,为杠板归的鉴定提供依据。方法 采用相关的生药学方法对杠板归的植物形态、性状、显微以及粉末特征进行研究。结果 光学显微镜下观察杠板归粉末,发现有较多草酸钙簇晶,有分泌细胞、钩刺,偶有螺纹导管;杠板归叶下表皮有较多气孔分布,气孔类型为不等型。结论 杠板归粉末、茎和表皮的显微特征具有一定的鉴别意义,对杠板归的生药学特性进行了初步鉴定。

  关键词:杠板归;生药学;鉴定

  引 言

  蓼科蓼属植物杠板归(Polygonum perfoliatum L.),又名扛板归、退血草、蛇牙草、刺犁头、犁头草、贯叶蓼、老虎刺等,以干燥地上部分入药。其始载于《万病回春》,谓“四、五月生,至九月见霜即无。叶尖青如犁头样,子圆如珠生青熟黑,藤有小刺,”。在我国各地均有分布,大多生于阴湿草地,河岸,路边的草丛中。根据文献记载,杠板归入肺、小肠经,味酸。能清热解毒,祛痰止咳,散瘀止血,利湿消肿,主要用于治疗痈肿疔疮,丹毒,瘰疬,痢疾,黄疸等,也治毒蛇咬伤,跌打损伤。在民间用药经验中,杠板归经常用于带状疱疹、痈肿、瘰疬、湿疹、疱疮、水肿胀等,治愈效果显著[。

  据现代研究报道,杠板归具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗癌、止咳祛痰等作用,而且还对肝纤维化有良好的拮抗作用。临床常用于治疗细菌性痢疾、咳嗽、带状疱疹、烧伤、蛰伤等疾病,均有比较好的疗效,并且在应用过程中没有发现不良反应。而且杠板归药源丰富,能够治疗多种疾病且效果良好,具有比较好的开发利用前景。然而目前国内外对杠板归的研究主要集中于药理活性以及临床应用的研究,鲜有相关的生药学研究。本课题从杠板归的基源性状、显微特征、气孔指数等方面对杠板归的生药学特性进行了初步的研究,为他人鉴定为杠板归提供了依据。

  1 实验材料与方法

  1.1 实验材料

  1.1.1 药材

  实验材料于2016年10月采自浙江省杭州市富阳区浙江中医药大学南门对面小土坡,经浙江中医药大学中药资源研究所俞冰副教授鉴定所采摘植株为蓼科蓼属植物杠板归(Polygonum perfoliatum L.)。

  1.1.2 试剂

  无水乙醇,天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20161105;

  番红染液,天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20160913;

  固绿染液,国药集团化学试剂有限公司,生产批号:wc20071126;

  二甲苯,华东医药股份有限公司,生产批号:20130912;

  水合氯醛,上海化学试剂采购供应五联化工厂,批号:20100915;

  中性树胶,中国上海标本模型厂,生产批号:20120917。

  1.1.3 实验仪器

  尼康显微镜,高速粉碎机

  1.2 实验方法

  1.2.1 原植物形态

  采集新鲜的杠板归植株,观察其形态特征,拍摄图片记录。

  1.2.2 茎横切面观察

  小心洗去杠板归外部附着的泥土或其他污物,在茎处取适当的部位,切成长约2厘米的小段,尽可能使切面平整。以左手的拇指及食指夹住小段,中指略低抵住植物,右手持刀,刀口向内,自左向右内向平行牵曳切片。过于柔软的材料(如杠板归的叶),难以直接拿住做切片,可夹入萝卜中,便于持握操作。

  把切下来的茎横切片薄片用沾水的镊子小心地移入放有清水的培养皿中。用肉眼挑选比较薄而完整的切片于载玻片上,置显微镜下观察,去细胞清晰无多层细胞重叠或破碎者供染色。将选好的切片(4-8片)置一个干净的蒸发皿内,加30%乙醇4-5滴,片刻后倾去,再加50%乙醇4-5滴,置1分钟后倾去,加50%乙醇-番红染色液1-2滴,放置5-10分钟。用吸水纸小心吸去番红染色液,再加50%乙醇,然后继续用70%、80%、90%、95%的乙醇等各浓度梯度乙醇脱水,各约1-2分钟。每次倾去乙醇后,应将蒸发皿内的液体擦干,再依次加入浓度较高的乙醇。用95%的乙醇脱水后,加固绿染液1-2滴,约35秒左右,吸去固绿染色液后,再用95%的乙醇洗去浮色2、3次。然后用无水乙醇脱水3次,再用1/2二甲苯-1/2乙醇溶液洗涤4次左右后,用二甲苯滴加3次使材料完全透明。如果材料出现乳状混浊,则说明脱水不彻底,那么再用无水乙醇脱水,按之前的步骤再次透明。

  把蒸发皿的切片(1-2片)转移到干燥、清洁的载玻片上,加1滴二甲苯,再加1滴中性树胶于切片上。右手拿住镊子夹着盖玻片一侧的边缘处,将它的另一侧接触中性树胶液体的左边,缓缓放下,使得染色脱水好的薄片在盖玻片的中央,保证无气泡产生。再将干燥后的制片放于于光学显微镜下观察,利用电脑上的显微成像系统观察,并拍摄照片记录结果。

  1.2.3 粉末制片

  将采集的扛板归原植物除杂,置60℃烘箱里干燥烘干,用高速粉碎机将其研成细粉。用解剖针蘸取适量粉末在载玻片上,滴2-3滴水合氯醛溶液,搅拌均匀之后,将载玻片放在在酒精灯上来回移动加热,进行透化,烤至快干时再次滴加水合氯醛溶液,一直到粉末透化地较为清晰位置,停止加热,立即加如1-2滴稀甘油,再用上述的方法盖好盖玻片,用吸水纸小心吸去周围多余的试剂,置于光学显微镜下观察,用数码显微成像系统记录观察结果。

  1.2.4 气孔指数的测定

  取新鲜洗净的杠板归叶片,用小镊子小心撕取叶的下表皮,按照类似的方法制作成永久装片并进行观察。用数码显微成像系统记录结果,进行统计。

  2 实验结果

  2.1 原植物形态

  杠板归为藤本,茎细长,多圆柱形,偶为类四棱形,直径1-5毫米,表面较嫩处绿色,大多为红棕色或棕色;节间长2-6厘米,节略微膨大,节间多为中空;茎上生有像倒钩一样的刺,节处具托叶鞘脱落后的痕迹;质脆,容易折断;叶柄长2-8厘米,有疏生的像倒钩一样的刺。杠板归叶互生,如盾牌状着生,展平后叶片呈近等边三角形,黄绿色或嫩绿色,少数叶片皱缩或破碎;叶的边缘和叶背面的主脉都有倒钩一样的刺,花序呈短穗状,顶生。气微弱,味微酸。(图2-1-1)

  图2-1-1 杠板归原植株

  2.2 显微特征鉴别

  2.2.1 茎横切面

  横切面类圆形或略方形;表皮由一列排列紧密的淡棕色的长方形或方形的细胞组成。皮层由2-4列排列疏松的类圆形薄壁细胞组成。中柱鞘纤维由4-8列排列紧密且壁木质化的多角形细胞组成,且成环存在,还有16-20个无限外韧型维管束,排列成环;木质导管类圆形或圆形,4-6个。髓射线较宽,由3-6列呈长方形或类圆形的细胞细胞构成。髓部由多数排列疏松的类圆形薄壁细胞组成,所占茎横切面面积最大,且髓部内含多数的较大的草酸钙簇晶。(图2-2-1-1)由于杠板归茎上布有倒钩状刺,在茎横切中偶可观察到,是由多列长方形或斜长方形细胞组成。(图2-2-1-2)

  图2-2-1-1 茎横切面(10x)

  1 表皮 2 皮层 3 韧皮部 4 导管

  5 中柱鞘纤维 6 髓部 7 髓射线 8 草酸钙簇晶

  图2-2-1-2 茎上倒钩状刺的横切面(10x)

  2.2.2 粉末制片

  杠板归地上部分粉末黄褐色。通过水合氯醛透化后,放在光学显微镜下观察。在该粉末中可观察到棱角短钝的草酸钙簇晶,较多呈类圆形或圆形的分泌细胞,呈淡黄色或橙黄色,偶见红棕色块状分泌物;具有梯纹导管和螺纹导管,纤维束较多,呈淡黄色或者接近无色;偶含倒钩状刺,含少数腺毛及晶纤维。(图2-2-2-1)

  图2-2-2-1 粉末制片

  1 分泌细胞 2 纤维束 3 腺毛 4 螺纹导管 5 梯纹导管

  6草酸钙簇晶 7 分泌物 8 倒钩状刺 9 晶纤维

  2.2.3 气孔指数的测定

  用镊子小心撕取新鲜洗净的杠板归叶的下表皮制成永久装片,置于光学显微镜下观察,并用显微成像系统拍摄照片。发现下表皮有多数气孔的分布(图2-2-3-1),气孔类型为不等型(图2-2-3-2),保卫细胞呈肾形。运用公式,气孔指数=100×单位面积上的气孔数/(单位面积上的气孔数+同面积表皮细胞数),统计得到杠板归叶下表皮的气孔指数为13.18-22.76-29.56。

  图2-2-3-1 杠板归叶下表皮

  图2-2-3-2 气孔轴式(40x)

  3 分析与讨论

  该课题的实验设计和实验方法较为科学。本实验主要从显微特征方面对杠板归的生药学特征进行鉴定,本人就实验过程中所出现的问题进行以下讨论。

  在制作粉末装片时粉末的粒度应适中,过粗不易看到组织结构,过细组织结构会被破坏。在透化过程中,粉末应适量,太多不容易看到清楚地组织特征,可多次透化,保证能观察到清晰的特征。透化完应实时滴加稀甘油,防止放冷后水合氯醛结晶的析出。

  气孔通常多存在于植物体的地上部分,是CO2、O2和水蒸气等气体交换的通道,调节着植物的蒸腾作用、呼吸作用和光合作用等生理活动。马清温等人研究发现:气孔密度的变异系数大于气孔指数的变异系数。因此这个课题采用气孔指数对杠板归叶下表皮的气孔进行研究。通常情况下,叶上有气孔分布的植物下表皮的气孔密度是从叶片的基部到顶部是逐渐增加的。而在本实验的操作过程中,未考虑该因素的存在,故所得数据可能存在着一定的偏差。

  徒手切片法的操作较为简便、制片速度快而且能够及时观察到植物的组织结构,是教学实验、生物鉴定以及科研选材常用的方法。该实验的关键点有两个:切片和染色。切片下刀应干净利落,否则光学显微镜下会观察到细胞有明显被拖拉的痕迹,装片不够清晰。本次永久制片染色是采用番红-固绿染色法,可以将茎的皮层薄壁组织、韧皮部、木质部、髓等结构清楚的显示出来,在光学显微镜下便于观察。

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