周一至周五 | 9:00—22:00

期刊论文网 > 农业论文 > 水产渔业论文 > 水产类论文 高效液相色谱法对水产品中的甲醛测法的探讨

水产类论文 高效液相色谱法对水产品中的甲醛测法的探讨

2018-12-05 16:56:36来源:组稿人论文网作者:婷婷

  摘要:本文参照标准方法研究了高效液相色谱法对水产品中甲醛的定量测量。利用甲醛在酸性条件下与2,4-二硝基苯肼在60℃水浴衍化生成2,4-二硝基苯腙,对其生成的衍生物进行高效液相色谱测定,以甲醇:水(70:30)作为流动相,经ODS- QUOTE 柱分离,峰面积定量。研究结果显示,在本实验条件下甲醛的线性关系良好R= 0.9999 ,回归方程为Y=20.07X-10.60;灵敏度高,检出限为0.4mg/kg ;准确度高,实验加标回收率为84-98% ;标准偏差为0.059;方法重现性良好,其中RSD仅有0.415% ,满足水产品中甲醛的残留含量的测定要求。本研究揭示了高效液相色谱法对甲醛定量测量的灵敏度与可靠性,有助于快速测定水产品中的甲醛含量以保障消费者的食用安全。

  关键词:水产品,甲醛,高效液相色谱法

  引 言

  我国是消费和生产甲醛(formaldehyde,CH2O)最多的几个国家之一,甲醛是一种重要的化工原料。因为甲醛价格低、用途广、容易制备而被广泛应用到化工、建材、食品、材料、纺织等各个行业,给人们带来便利的同时对人体也会造成多种危害。甲醛具有遗传毒性作用,以引起DNA-蛋白质交联和氧化损伤DNA/染色体断裂为主,国际癌症研究机构(IARC)已将甲醛列为可疑致癌物之一,并于2004年6月决定将甲醛定位 = 1 \* ROMAN \* MERGEFORMAT I类人体致癌物质,在我国有毒化学品控制名单上高居第二位,高速发展的经济丰富了人们的精神和物质文明,也带来了对人类生存环境的进一步污染,所以甲醛已经成为我们广泛关注的社会问题。

  研究调查显示,大量的含鱼类在内的水产品中有内源性的甲醛产生,不仅如此,还有些许不良的商家为了产品的卖相和保存,就会广泛应用廉价的、不明数量的甲醛。为了确保安阳地区的人们能够放心的食用水产品,安阳疾控中心(ANYANG CDC)的工作人员将不定期地对安阳各大水产品中的甲醛含量进行测定。现如今,不管是普通的食品还是水产品,对于其中的甲醛的测定研究方法都比较成熟而且比较多。主要有以下四种方法,光度法(分光光度法、催化动力学光度法、荧光光度法)、色谱法(气相色谱法、高效液相色谱法)、电化学法(示波极谱法、吸附伏安法)、化学滴定法(电位滴定法、碘量法、酸碱滴定法),目前测定甲醛的方法主要有高效液相色谱法、分光光度法、气相色谱法,这一次是安阳疾控中心第一次采用高效液相色谱法的方法来测定水产品中甲醛的含量。

  高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是20世纪60年代末、70年代初发展起来的一种新型分离分析技术,随着其不断地改进和发展,目前作为一种十分成熟稳定的检测技术已经广泛用于药物的残留分析。HPLC是以液体为流动相的色谱工程,能够分离出除了气体外的几乎所有的物质。HPLC系统主要由贮液器、高压输液泵、进样系统、色谱柱、检测器和数据处理系统等组成。高效液相色谱法具有速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。高效液相色谱仪使用的检测器都包括紫外检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电化学检测器等。紫外检测器是目前应用最广泛的检测器,它的主要特点是灵敏度高、线性范围宽,对流速和温度变化不敏感。高效液相色谱法现在有许多的分支,并且已经广泛地应用与医药卫生、能源环保、生理生化和有机合成等领域中,以解决各种分离、分析的课题。为了能不断提高对水产品中甲醛含量测定的精确度,安阳疾控中心的工作人员带领我们本文认真地探讨了高效液相色谱法对水产品中的甲醛含量的测法以求确保安阳地区的广大民众能够吃得安心吃得放心吃出健康。

  因此,本文会简单的介绍这次测定甲醛的“新方法”,本方法精密度高,具有良好的分离度,基本没有杂质干扰,回收率对于浓度较低的甲醛的检测很高,测定的结果更为可靠准确。

  第一章 绪论

  1.1甲醛的简介、来源和应用

  1.1.1甲醛的性质

  甲醛是由一个碳原子、两个氢原子和一个氧原子构成,分子式为CH2O,相对分子质量为30.03,分子结构式为:

  甲醛(HCHO),又名蚁醛,为无色气体,有特殊的刺激性臭味,沸点低、易挥发、易燃烧,易溶于水、醇,微溶于丙酮、苯和醚,是一种对人的神经系统、肺、肝脏都可以造成伤害的原生质毒,气体相对密度为1.067(空气为1),液相相对密度为0.815(20℃),熔点为-92℃。

  纯甲醛的物理性质:纯甲醛在常温下是一种具有窒息作用的无色气体,具有强烈刺激性气味,对人类的眼睛和黏膜有强烈的刺激作用,能够溶解于水中,并且可以形成多种浓度的水溶液。纯甲醛气体是可燃性的气体,着火点为430℃,它与空气混合能形成爆炸性的混合物,爆炸极限为7.0%~73.0%(体积分数)。纯甲醛气体在-19℃的时候能液化形成纯甲醛液体,他在较低的温度下能与非极性的溶剂(如甲苯、醚、醋酸乙酯、氯仿等)以任意的比例想混溶,它的溶解度的大小随温度的增高而减小。纯甲醛液体在-118℃时能够凝固成白色片状的固体甲醛[14-18]。

  甲醛的水溶液为无色透明液体,具有强烈的刺激性气味。在大气压下,含甲醛55%(质量分数)以下的甲醛水溶液的沸点在99~100℃之间。其中25%(质量分数)甲醛的水溶液的沸点为99.1℃,而35%(质量分数)甲醛的水溶液的沸点为99.9℃。

  甲醛的化学性质:甲醛分子结构中纯在羰基氧原子和α-H原子,其化学性质很活泼,具有很高的反应能力,能参与加成反应、缩合反应、聚合反应、羰基化反应、分解反应、氧化还原反应等多种化学反应,生成许多重要的工业化学品和中间体。在常温下,甲醛气体极易溶于水、醇类和其他极性溶剂中。而无水甲醛溶于水的速率非常之快,并且发生反应,在22℃时一级反应速率的常数为9.8s-1。甲醛在工业上主要以水溶液、聚合体和各种衍生物的形式加以应用,无水单体甲醛在工业上是无法应用的。

  甲醛的主要物理性质的数据列于表1.1。

  表1.1 甲醛的主要物理性质

  性 质数 据气体相对密度(空气为1)

  液体密度(-20℃)/(kg/m3)

  (-80℃)/(kg/m3)

  沸点(101.38kPa)/℃

  熔点/℃

  临界温度/℃

  蒸发热(19℃)/(kJ/mol)

  (-109~-22℃)/(J/mol)

  临界压力/MPa

  临界密度/(kg/m3)

  生成热(25℃)/(kJ/mol)

  (在甲醇中)/(kJ/mol)

  (在正丙醇中)/(kJ/mol)

  (在正丁醇中)/(kJ/mol)

  标准自由能(25℃)/(kJ/mol)

  比热容C/[J/(mol·K)](标况下)

  熵S/[J/(mol·K)](标况下)

  燃烧热)/(kJ/mol)

  黏度(-20℃)/(mPa·a)

  表面张力/(mN/m)

  体积膨胀系数/K-1

  溶解热(在水中)(23℃)/(kJ/mol)1.04

  815.3

  915.1

  -19.0

  -118.0

  137.2~141.2

  23.3

  27384+14.56T-0.1207T(T单位为K)

  6.784~6.637

  266

  -115.9±6.3

  62.8

  59.5

  62.4

  -109.9

  35.4(25℃)

  218.8

  561~571

  0.242

  20.70

  2.83×10-3

  62.0

  1.1.2甲醛的来源以及存在方式

  一、水产品中甲醛的来源

  用来给设施、工具消毒的溶剂(1%的福尔马林),环境的改良剂和环境的消毒剂(3%~4%)或者是和其他药物配伍作为给立体空间熏蒸消毒用的,可造成在水体中有一定量的残留。

  人为的添加,为了使水产品呈现出某些特殊的性状,就利用甲醛的某些特性(如防腐、延长其保质期、增加其持水性、韧性等),而向水产品中(特别是水发产品中)添加甲醛。

  水产品也会通过自身的代谢产生,在储藏的过程中(包括冷藏和冷冻的过程中)水产品在一些酶(特别是在氧化三甲胺酶)以及一些微生物的作用下可以自身产生甲醛。由于甲醛是一种代谢中间产物,因此有许多生物体内也存在低浓度的甲醛,多种水生动植物也能释放微量的甲醛。

  甲醛作为渔药的使用,蛋白质可以与其作用,与细胞质中的氨基部分结合,使其烷基化而呈现杀菌的作用,对于寄生虫、藻类、真菌、细菌、芽孢以及病毒等均有杀菌效果,特别是对车轮虫病、小瓜虫病等原生动物所引起的鱼病有很好的治疗效果。

  食品的容器的污染,一些以甲醛作为原料所制成的树脂成型品(如三聚氰胺、脲醛树脂、酚醛树脂等),这些树脂成型品中都含有一定量的甲醛。如果作为容器盛装水产品或者食品的,长期与容器接触或者受到酸碱的侵蚀,老化分解很容易,导致甲醛溶出而污染水产品。由于使用由甲醛生产的捆绑树脂、塑料制成品或者容器等,任何的食物都会含有一定量的甲醛,最高的含量可以达到5×10-6。

  有的水产品会随着冷藏的同时产生甲醛,通过S.Simeonidou研究7种地中海鱼在冷藏过程中甲醛含量的变化也可以得出冷藏过程中鱼肉可以产生和结合甲醛。部分水产品在高温烹饪的过程中也有可能通过分解反应生成甲醛。

  二、存在方式

  水产品中的甲醛存在方式可以分为3类:一是以游离状态存。二是可逆结合甲醛。三不可逆结合的甲醛。

  1.1.3甲醛的应用

  甲醛是一种属于用途广泛、生产工艺简单、原料工艺充足的化工产品,甲醛的用途非常广泛,应用于木材工业、纺织业、防腐溶液。合成树脂、表面活性剂、塑料、橡胶、皮革、造纸、染料、制药、农药、相片胶片、炸药、建材和消毒、熏蒸和防腐过程中都要用到甲醛,但是无论什么的使用都必须要有一个限量,有一个标准,一旦超标和超限,就会带来不利的影响。还有就是在我国水产品的消费量增加的情况下,不少的商贩为了延长水产品的保质期,让水产品的卖相和肉质看起来更好,也会往其中添加甲醛。甲醛还可用于鱼类和甲壳类等的疾病防治。有的地方还用甲醛水溶液来给设施、工具消毒,作为立体空间熏蒸消毒剂或环境消毒剂。

  1.1.4甲醛的危害

  甲醛具有刺激作用、毒性作用、致癌作用。可以引起多种人类健康影响(如中毒、过敏、哮喘、肺功能损害、癌症甚至死亡),尤其对中枢神经、血液和免疫系统有害。甲醛对黏膜有强烈的刺激作用,损伤咽、食道和胃的黏膜,对视觉器官、肺部和支气管尤为严重。对人体有极大的危害,所以国家早已明令禁止在食品中添加甲醛。慢性甲醛暴露则可产生神经毒性、生殖毒性、遗传毒性、致癌作用和呼吸系统损害,蛋白质、氨基酸、核酸等还可以与甲醛及其代谢物形成不稳定的结合物,转移至肾、肝和造血组织。人食用含有甲醛的食品后会导致肺水肿,还有中毒反应的可能,重者会出现昏迷,休克,轻者会出现上腹疼痛,头晕,呕吐,咳嗽等症状,进入人体的甲醛能凝固蛋白质。甲醛能和蛋白质的氨基结合,使得蛋白质变性,扰乱人体细胞的代谢,对细胞有着极大的破坏作用;食用含有甲醛的食品会使人类的肝功能和肾功能受到损伤,可能会导致肾衰竭。在所有的接触者中,孕妇和儿童对甲醛及其敏感,危害更大,Thrasher等的研究表明甲醛是导致妇女不孕症、癌症、胎儿畸形的潜在威胁物。甲醛可凝固蛋白质当它与氨基酸、蛋白质结合发生反应后,可以导致蛋白质变性,对细胞伤害极大影响细胞正常的新陈代谢,进而影响人类的身体健康。

  1.2水产品中甲醛测定方法的研究

  1.2.1水产品中甲醛的定性测定

  目前我国卫生监督检测机构一般在抽样调查水产品甲醛中,采用定性或半定量测定的方法,统计样品合格率,估计市场中甲醛的使用情况。甲醛的定性方面的研究主要依据甲醛与某些化学试剂的特异反应,主要包括间三苯酚法、亚硝基亚铁氯化钠法、三氯化铁法、亚硫酸品红法、乙酰丙酮法、变色酸氧化等方法,一般直接取水产品的浸汁液进行测定,方法简单易行,但灵敏度不高,因此需要选择一种或几种选择性好、操作简便、反应灵敏,适合水产品现场检测的快速定性方法。

  1.2.2测定水产品中甲醛含量的方法

  甲醛的检测方法繁多,国外在甲醛检测分析方面做了大量的工作,并已经成功地建立了几种有效的检测方法;目前我国也开始加强了这方面的研究,甲醛测定的测定方法主要有分光光度法、色谱法、电化学法、化学滴定法等。随着各种新技术的应用和人们对甲醛污染的重视,高灵敏度的气相色谱法、液相色谱法、电化学法、极谱法等新的分析方法不断得到建立。如何针对不同的样品要求和设备,选择最佳的快速准确的分析方法,已变得十分必要。

  1、分光光度法(乙酰丙酮法)

  分光光度法测定的主要方法有乙酰丙酮法、AHMT法、MBTH法、铬变酸法、付品红法等几种。这几种方法的原理均是通过甲醛与某种或某些化合物反应,进而产生某种带有颜色的物质,在特定波长下进行分光光度测定,其中以乙酰丙酮法最为普遍。农业部5172-2002 标准和中华人民共和国水产行业标准[SC/T2035-2006]中规定了水产品中甲醛的定性和定量方法,在现阶段应用比较普遍。乙酰丙酮法的原理是利用甲醛与乙酰丙酮及氨在沸水浴中生成黄色化合物二乙酰基二氢甲基吡啶后,在 412nm 下进行分光光度测定。

  2、色谱法

  色谱法主要通过衍生化反应转化为可分析的化合物,用有机溶剂萃取富集后进行色谱测定。主要有气相色谱法、高效液相色谱法、离子色谱法等,直接利用色谱法较少,一般是采用衍生化或与其它分析仪器相联用(如GC/MS、HPLC/UV 等)。气相色谱中应用衍生反应是为了增加样品的挥发度或提高检测灵敏度,而高效液相色谱的衍生法是指在一定条件下衍生反应的产物有利于色谱检测或分离。

  (1)气相色谱法(GC)

  气相色谱法有直接顶空进样及GC衍生法,直接顶空法只对甲醛浓度较高的样品适用,而衍生法则可检测低浓度甚至痕量的甲醛。对于气态基质中的甲醛、有机胺类、羧酸类污染物的萃取监测,通常采用衍生化反应将极性分析物衍生化为非极性分析物;将非挥发性分析物衍生化为挥发性分析物,进一步提高分析物在涂层与基质间的分配系数,提高萃取选择性和检测灵敏度。

  美国EPA 556提供了一种检测甲醛和其他醛类的方法。通过甲醛和五氟苄基羟胺(Pentafluorobenzyl hydroxylamine PFBHA)形成肟化合物,再用己烷提取后在GC-ECD 或GC-MS进行检测。当然ECD检测器提供了最佳的检测限(<1 μg/L)。GC/MS更易定性,但检测限在~10 ug/L。气相色谱法操作简便,测定线性范围宽,分离度好,干扰成分的影响被最大程度上减弱了,因此可以准确反映样品中甲醛的真实情况。黄晓兰等利用超声振荡、DNPH衍生的方法提取甲醛,可消除复杂基体的干扰,简便快速,准确可靠,灵敏度高,已应用于面粉、面条、啤酒和饮料等各类食品。

  随着样品提取技术的发展,应用固相微萃取(SPME)技术和GC/MS联用分析测定甲醛取得良好进展,并可用于水体、酒、化妆品及空气中的甲醛检测[57-58]。

  (2)高效液相色谱法(HPLC)

  高效液相色谱法甲醛与 2,4-二硝基苯肼(DNPH)反应生成腙,衍生化产物醛腙用有机溶剂萃取富集后,在一定温度下蒸发、浓缩,再以甲醇或乙腈溶解或稀释,最后经 C18 柱分离,在 356-365nm 间的紫外下进行高效液相色谱测定。由于溶解 2,4-二硝基苯肼采用的溶剂不同,浓度不同,则衍生反应的温度和时间也不同。DNPH 法优点是检测限很低;缺点是有其它醛、酮等干扰成分存在,也与 DNPH 反应,将导致分析时间延长及要求流动相梯度洗脱。

  EPA提供了使用DNPH衍生化后HPLC检测的方法(METHOD 8315A)[59]。使用DNPH衍生可同时检测14 种常见醛类和酮类。LC-MS/MS 由于MS/MS消除了干扰,检测限为~20 μg/L。中华人民共和国水产行业标准[SC/T2035-2006]提供了水产品中甲醛测定的HPLC方法,检测限为0.2mg/kg。

  马敬军等通过水蒸汽蒸馏法分离提取水产品中的甲醛,采用二硝基苯肼

  衍生一高效液相法测定甲醛含量,确定了有关测定的方法参数。该方法样品蒸馏

  液检出限为7.20μg/L,样品中的检出限为0.2mg/kg,回收率为90.0%-104.5%。方法灵敏度高,专一性强,重复性好,可为水产品甲醛含量监测提供灵敏、准确的分析方法。

  总之,甲醛的各种检测方法各有利弊,在实际工作中要针对不同的分析对象和浓度高低做出恰当的选择。

  1.2.3分光光度法与高效液相色谱的简单比较

  分光光度法操作简单、不需要复杂的前处理而且仪器设备简单,测定的线性范围广,性能稳定,效率高,适合大批量样品的分析,对于高浓度样品检测的回收率较高,相关性好,不需要复杂的前处理,成本低,但是灵敏度较低,对于低浓度样品检测的回收率略低。

  高效液相色谱法具有良好的分离度,对于低浓度的甲醛检测回收率较高,测定结果准确可靠,精密度高,杂质干扰基本没有,但是前处理比较复杂,分析成本比较高。

  1.3研究的目的和意义

  1.3.1研究目的

  本论文研究的目的是探讨水产品中甲醛的测定研究方法高效液相色谱法,通过实验了解安阳地区水产品中甲醛的含量。

  1.3.2研究意义

  随着人民生活水平的日益提高,人们的生活品质也越来越高,水产品也随之普及到了每个家庭的餐桌上。因此,不少的商家为了谋取暴力,为了让水产品的卖相看上去更好看,为了延长水产品的保质时长,他们会向水产品中加入甲醛这对爱吃水产品的人们带来了严重的身体健康的威胁。同时随着人民生活水平的日益提高,人们对食品安全的重视度也越来越高。虽然世界各国对水产品中的甲醛都有研究,但是总体上都还处于初步阶段,水产品中甲醛的问题还是不容忽视。

  虽然我国的各相关部门也出台过相关甲醛的标准,但是目前都还不够完善。所以我们更应该推行更为精确的方法来测定水产品中的甲醛的技术,进而提高水产品的安全性,满足各部门各行业水产品中甲醛检测的要求保证水产品的食用安全,本次研究正是采用了对水产品中甲醛的含量更为准确的、稳定性高、抗干扰性强的检测方法,为推行和使用更为准确的、稳定性高、抗干扰性强水产品中甲醛含量的测定方法有重要的意义。

  1.4研究内容

  如今水产品已经离不开我们的生活,为了保证安阳地区的人们能够吃上安全的水产品,测定了安阳地区部分水产品中甲醛的含量,并根据国家标准对比测定的结果,判断安阳地区的水产品的食用是否会给安阳的人们带来不健康的影响,为了保障消费者的食用安全,安阳疾病预防控制中心(ANYANG CDC)都会不定期地从安阳各个水产品销售点抽查水产品。研究调查显示,大量的还鱼类水产品中有内源性的甲醛产生,不仅如此,还有些许不良的商家为了产品的卖相和保存,就会使用应用广泛的、廉价的、不明数量的甲醛。然而甲醛对人体的危害又是极大的,是 = 1 \* ROMAN \* MERGEFORMAT I类人体致癌物质。本文简单地介绍了水产品中甲醛的来源,甲醛的物理和化学性质以及甲醛的应用与危害。本文采用了与以往CDC测定方法不同的高效液相色谱法(HPLC),以便更准确的测定水产品中甲醛的含量。本文会简单的介绍这次测定甲醛的“新方法”,本方法精密度高,具有良好的分离度,基本没有杂质干扰,回收率对于浓度较低的甲醛的检测很高,测定的结果更为可靠准确。

  第二章 实验部分

  2.1实验材料

  2.1.1原理

  甲醛在酸性条件下与2,4-二硝基甲苯肼在60℃水浴衍生化生成2,4-二硝基苯腙,反复分离提取二氯甲烷后,无水硫酸钠经过脱水,水浴蒸干,甲醇溶解残渣。ODS-C18柱分离紫外检测器338nm检测,以保留时间定性,根据峰面积定量,测定甲醛含量,

  2.1.2实验仪器

  LC-20AT是一台双泵串流溶液传输单元。它为高效液相色谱提供了更高的准确度和敏感度。

  本研究所用的主要实验仪器如表2.1所示

  表2.1主要实验仪器与厂商

  仪器名称型号厂商高效液相色谱仪

  色谱柱 inertsustain C18柱

  TGL-16台式高速冷冻离心机

  恒温水浴锅

  涡旋混合器

  高速组织捣碎机

  移液器

  0.2μm滤膜(配有LC-20AT输液泵;DGU-20A在线脱气机;SIL-20A自动进样器;CTO-20A柱温箱;PDA二级阵列管检测器)

  (填料直径5µm 内径4.6mm 柱长250mm)

  (8000r/min)

  双列八孔恒温水浴锅

  vortex-genie 2/2T

  T18 digital ULTRA-TURRAX

  岛津企业管理(中国)有限公司

  岛津技迩(上海)商贸有限公司

  四川蜀科仪器有限公司

  北京市永光明仪器厂

  美国SI公司

  德国IKA中国分公司

  天津市玻璃仪器厂

  海宁市桃沅膜分离厂

  2.1.3实验试剂

  本研究所用的主要试剂见表2.2

  表2.2主要试剂与厂商

  编号 试剂名称 规格厂商1 甲醇 色谱纯

  2 二氯甲烷 分析纯

  3 2,4-二硝基甲苯肼 分析纯

  4 甲醛溶液36%~38% 分析纯

  5 无水硫酸钠 分析纯

  6 浓盐酸 分析纯山东淄博临淄东晖化工有限公司

  深圳市华昌化工有限公司

  北京华科盛精细化工产品贸易有限公司

  北京华科盛精细化工产品贸易有限公司

  杭州盈钰化工有限公司

  开封种田化工有限公司

  2.1.4标准溶液的配置

  (1)甲醛标准贮备溶液:吸取0.3mL含量为36%~38%甲醛溶液于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,为甲醛标准贮备溶液,冷藏保存两周,临用时稀释至20µg/mL。

  (2)2,4-二硝基苯肼溶液:称取100mg2,4-二硝基苯肼溶解于24mL浓盐酸中,加水定容至100mL。

  (3)无水硫酸钠:经550℃高温灼烧,干燥器中贮存冷却后使用。

  (4)甲醇:色谱纯,经过滤、脱气后使用。

  2.1.5实验样品

  编号 样品名称 性状 生产地点1 鱿鱼 鲜活水产品 青岛

  2 鱿鱼 冷冻水产品 大连

  3 鱿鱼 干制水产品 青岛

  4 鳕鱼 冷冻水产品 大连

  5 鳕鱼 鲜活水产品 青岛

  6 海带 鲜活水产品 广州

  7 海带 鲜活水产品 浙江

  8 海带 鲜活水产品 青岛

  9 毛肚 鲜活水产品 大连

  10 毛肚 鲜活水产品 日照

  11 毛肚 鲜活水产品 浙江

  12 海参 鲜活水产品 大连

  13 海参 鲜活水产品 青岛

  14 海参 鲜活水产品 广州

  15 鳗鲡 鲜活水产品 浙江

  16 鳗鲡 鲜活水产品 日照

  2.2实验方法[62]

  2.2.1取样

  鲜活水产品,取肌肉等可食用部分。

  冷冻水产品,经半解冻直接取样,不可用水淋洗。

  水发产品,可取其水发溶液直接测定或将样品沥水后取食用部分测定。

  干制水产品,取肌肉等可食部分。

  2.2.2方法

  样品前处理:准确称取10.00g粉碎样品(<40m)于50mL离心管中,加40mL水振荡摇匀,涡旋3min。转速5000r/min离心5min。取上清液2.0mL与10mL离心管中,加0.4mL2,4-二硝基苯肼溶液混匀,置60℃水浴15min衍生。取出在流水中快速冷却至室温。加入2mL二氯甲烷涡旋混合器振荡萃取1min,取上清液再用2mL二氯甲烷萃取两次,合并三次萃取液,过无水硫酸钠柱脱水,50℃水浴下氮气吹至近干。加入1.0mL甲醇混匀,过0.2µm滤膜后上机测定。

  2.2.3高效液相色谱条件

  (1)色谱柱:inertsustain C18柱(填料直径5µm,内径4.6mm,柱长250mm)

  (2)柱温:40℃ 二级阵列管检测器

  (3)流动相:甲醇+水:70+30 进样量:20µL 流速:1.0mL/min

  (4)检测器波长:338nm

  2.2.4加标回收实验

  准确称取10.00g粉碎后的同一样品(<40m)于50mL离心管中12份,6份各加2µg/mL的甲醛应用液0.25mL(样一),另外6份各加20µg/mL的甲醛应用液0.50mL(样二),加40mL水振荡摇匀,涡旋3min。转速5000r/min离心5min。取上清液2.0mL与10mL离心管中,加0.4mL2,4-二硝基苯肼溶液混匀,置60℃水浴15min衍生。取出在流水中快速冷却至室温。加入2mL二氯甲烷涡旋混合器振荡萃取1min,取上清液再用2mL二氯甲烷萃取两次,合并三次萃取液,过无水硫酸钠柱脱水,50℃水浴下氮气吹至近干。加入1.0mL甲醇混匀,过0.2µm滤膜后上机测定。

栏目分类